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    药检中各控制菌检测的注意事项——大肠埃希菌检测



    录入时间:2008-12-1 16:32:15 来源:青岛银河澳门官网入口

    (1)MUG法不必从混合菌中分离单个菌落。除大肠埃希菌外,尚有部分志贺菌属、沙门菌属的菌株,以及少数革兰阳性球菌、杆菌和芽孢菌,其MUG为阳性。因此,在MUG培养基成分中增加了去氧胆酸钠,可排除革兰阳性菌的干扰。至于志贺菌、沙门菌在胆盐乳糖培养基中较难生长,即使有生长,本法也能检出。既然药品中不得检出大肠埃希菌,更不允许检出志贺菌、沙门菌。 
    (2)配制MUG培养基时,务必校正pH,灭菌后pH不得过7.4,否则pH偏高,MUG分解,本身则显荧光;分装MUG培养基的试管应挑选,试管、蛋白胨不得显荧光。 
    (3)培养时间:供试品培养液接种于MUG培养基中的培养时间,一般在4h、24h 观察是否产生荧光,如荧光很微弱,不能准确判断时,该延长培养至48h再观察结果。由于大肠埃希菌各菌株间的MUG的属性不完全相同,对底物和底物浓度反应的差异;培养基中选择因子的影响;培养时间;温度;pH的改变;大量竞争菌和样品本身物质成分的干扰等;对结果的判断亦有影响。 
    (4)结果观察:取供试品的MUG试管、阳性对照管。阳性对照管同时在366nm紫外灯下观察,阳性对照管应有较强蓝白色荧光,阴性对照管无荧光。试品MUG管是否有荧光,应仔细观察比较,或将各管调换位置(阴性管居中),适当倾斜试管,阳性对照管荧光强烈,影响供试品管与阴性对照管的观察时,亦该移去阳性对照管。 
    (5)药品中污染的大肠埃希菌,易受生产工艺及药物的影响。在曙红亚甲蓝琼脂或麦康凯琼脂平板上的菌落形态特征有变化时,挑取可疑菌落往往凭经验,主观性较大,务必挑选23个以上菌落分别做IMVIC试验鉴别,挑选菌落越多,挑选阳性菌的机率越高,如仅挑选一个菌落 IMVIC试验的鉴别,则易漏检。 
    (6)在IMVIC试验中,以灭菌接种针沾取菌苔,首先接种于枸橼酸盐琼脂斜面上,然后接种于蛋白胨水培养基、磷酸盐葡萄糖胨水培养基中。切勿将培养基带入枸橼酸盐琼脂斜面上,以免产生假阳性结果。枸橼酸盐利用试验培养时间,原定为2d,根据试验资料,发现培养3d后,枸橼酸盐利用试验产生阳性。仅培养2d是不够的,故试验培养时间改为2—4d。 
    (7)阳性对照试验是检查供试品是否有抑菌作用及培养条件是否适宜。阳性对照菌液的制备、计数及加入含供品的培养基中等操作,不能在检测供试品的无菌室或净化台上进行,必须在单独的隔离间或净化台操作,以免污染供试品及操作环境。 
    (8)在各类供试品中检测大肠杆菌及其他控制菌,按一次检出结果为准,不准抽样复检。检出的大肠埃希菌及其他控制菌培养物须保留 1 个月,复查。   
       

     

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