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常用消毒灭菌效果评价实验操作实例



录入时间:2008-11-27 15:55:46 来源:青岛银河澳门官网入口

1、目的要求:熟悉压力蒸汽灭菌、紫外线消毒效果试验的检测方法。 
2、器材和试剂 
(1)菌种:枯草芽孢杆菌黑色变种。 
(2)指示剂:嗜热脂肪芽孢杆菌菌片、枯草芽孢杆菌黑色变种菌片。 
(3)培养基:普通营养琼脂培养基、普通肉汤培养基、溴甲酚紫蛋白胨水。 
(4)试剂:消毒剂及其相应的中和剂、洗脱液。 
(5)其他器具:压力蒸汽灭菌器、紫外灯、无菌镊子、无菌吸管。 
3、步骤和方法 
(1)压力蒸汽灭菌效果的检测方法:①将5片嗜热脂肪芽孢杆菌菌片分别装在灭菌的试管中,管口用牛皮纸包封,然后置在通气储物盒内;②将通气储物盒放于手提压力蒸汽灭菌器 内5个不同的位置;③103.43kPa灭菌20—30min后,以无菌手续取出菌片,放入溴甲酚紫蛋白胨水培养基中,于56%培养48h,观察培养基颜色的变化;④如所有培养基均不变色,外观澄清,说明无菌生长,则灭菌合格;如有1支培养基颜色变黄且外观浑浊,说明有细菌生长,则灭菌不合格。 
(2)紫外线杀菌效果的检测方法:①取市售大肠埃希菌ATCC25922染菌的载片8个置于距紫外灯管垂直1m处,开启紫外灯照射,于30、60、90、120min4个不同间隔时间各取出2个放入盛有洗脱液的试管中,振摇80次后进行适当稀释;②取0.5ml洗脱液做倾注平板,35℃培养48h,做菌落记数;③试验同时做阳性对照,除不做照射外,其他操作同上;④计算杀灭率 
  杀灭率=(阳性对照组菌落数-试验组菌落数)*100%/ 阳性对照组菌落数 
⑤对指示菌杀灭率≥99.9%,判为消毒合格。达到物理检测标准时,作为消毒合格的参考标准。    
   

 

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