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    组织培养技术—组织培养原理1



    录入时间:2008-11-19 17:13:09 来源:青岛银河澳门官网入口

         将人或动物离体的活组织或分散的活细胞,在实验室的试管或培养瓶中,模拟体内的生理条件使之生存和生长,称为组织培养。包括器官培养、组织块培养和细胞培养。 
    1、组织来源 
       人、猴、啮齿类动物、禽的胚胎和脏器为组织培养常见的组织来源,对于虫媒病毒可使用蚊组织,手术切除的癌瘤组织可用于建立传代细胞。组织要保持新鲜,一般须在6h内处理。 
    2、单细胞的制备 
       组织分散成单细胞的方法主要有3种:机械分散法、酶消化法、螯合剂分散法。后两种方法多与机械法结合使用。 
    (1)机械分散法:适用于细胞间连接较松的组织,如鸡胚组织。可将鸡胚剪成1mm3的小块,放在底部有一块铜丝网的10—20ml注射器内,用手的压力将组织细胞挤过网孔。脾脏组织的分散可将脾组织放在无菌平皿中,用1ml注射器芯轻压,使细胞出来。 
    (2)酶消化法:目前主要用胰酶,它能消化细胞间的蛋白质成分。组织块受胰蛋白酶作用后细胞变为圆形,再用吸管机械吹打或电动搅拌细胞可分散。胰蛋白酶用的浓度过大或时间过长对细胞均有损害,影响细胞的生长。一般用2.5—5g/l的胰酶,消化液量为消化物的5—10倍,37℃作用20—30min,大的组织块可作用60min,pH值范围一般在7.4—7.6。 
    (3)螯合剂分散法:钙离子和镁离子是细胞结合的离子。单层细胞在缺少钙、镁离子的环境下,细胞变圆,分散为单细胞。乙二胺四乙酸容易与钙、镁螯合而使细胞间及细胞与玻璃培养瓶间的钙、镁离子螯合,而达到细胞分散的目的,但对于新鲜组织的分散效果不佳,故多用于单层细胞的分散。乙二胺四乙酸不受血清的抑制,所以,消化后需用Hanks液洗去残留乙二胺四乙酸,以免影响细胞生长。    
       
       

     

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