一、药敏试验目的
选择治疗药物
鉴定细菌
流行病学的调查
耐药菌株的监测
注意：敏感度可预测的菌，常驻菌、污染菌、不应做药敏试验
二、敏感和耐药的定义
敏感：常用药量愈期有效 MIC低于抗菌药物治疗浓度的下限
耐药：常用药量愈期无效 MIC高于抗菌药物治疗浓度的上限
人体血清内抗菌药物浓度与不同菌株MIC的关系
1、敏感与耐药的分界根据药理学和抗菌药物MIC而定
2、不同药物对不同细菌的分界点不一致
3、敏感与耐药是在一定条件下的相对概念
三、方法学介绍：原理、方法、结果判断、报告方式
（一）稀释法：
1、试管法 液体稀释法 P104 〈定量〉
2、平皿法 固体稀释法 P106
（二）扩散法：常用方法 P100 〈定性〉
（三）stokes法
1、稀释法，平皿的优点：可同时接种多个菌
可发现混合菌株
可观察接种物的生长善状况
测待测菌同时必须做对照菌株的参照
目的：监测菌株生长环境及试验条件
稀释法三步骤：标准 测试 判断
报告方式：直接报MIC，是敏感还是耐药
MIC，结合血清或体液中抗菌药物浓度，判断是敏
感还是耐药
2、扩散法：方法 P101
测被测菌同时须做质控菌株的参照，以监测试验条件是否合格
步骤：标准 测试 结果判断
影响因素及其引起常见错误差的原因：P103
1）影响结果的主要因素
培养基：A厚度4mm， B拮抗物，C Ca2+ .Mg2+ 浓度
被检菌接种量（浓度）：0.5麦氏比浊管 （1.5亿/ mL）
活菌
含药纸片：A 药量 B 抗菌活性
2）注意事项
纸片距平板边缘15mm，各纸片中心相距24mm
实验室试验条件经标准菌株监测稳定后，不要轻易变动
扩散慢的药物（ex：多粘菌素，磺胺等），S可报告，R
可稀释法重做，以免出现假耐药
生长慢的细菌不适合做扩散（ex草绿色链球菌）
药敏试验不能在CO2 缸内孵育 CO2+H2OÕ H2 CO3 影响PH
°结果读取法 NCCLS标准
±中度敏感为缓冲地带一般不报告
A：为了避免误差〈中介度〉
B：加大剂量或患病部位
比血清的血药浓度高
可应用
1、混合菌生长
2、可能是变形杆菌
3、药物扩散慢
有高度耐药菌杆株出现
药物选择性压力à敏感菌株，耐药菌株，药物
逐渐无效
粘质沙雷出现，双环现象报R
3、stokes法：
外圈，接种敏感的质控菌
里圈，接种被检菌
两菌交接处贴合抗菌素的纸片，35°C孵育16-18h
优点：抵消琼脂间的误差
抵消纸片的误差
用自身对比来判断结果，抵消结果判断的误差
敏感N-3
中介度N-3>c>3
耐药c£3
注：S和R分界点的判断表：
适用绝大多数需氧菌和兼性厌氧菌
基本适用链球菌、嗜血杆菌、淋球菌
扩散法不适用于厌氧菌
稀释法和扩散法的比较
稀释法 扩散法
菌株MIC 直接测出 间接测出
操作方法 繁 简单
用于扩散慢的抗菌药 适合 不适合
用于生长慢的菌 适合 不适合
测出值 倍比 连续
绝对扩散法和比较扩散法的对比
绝对扩散法 比较扩散法
敏感和耐药的 NCCLS标准或厂商指定 用NCTC标准菌株做
分界点 固定的分界点 扩散法后，算出分界点
根据实验的条件而波动
对药敏试验的 要求严格，必须按NCCLS 不太严格，试验条件波动
要求条件 或厂商指定的纸片含药量 对结果影响较小，可由实
规定的培养基等试验条件 验室自行配制培养基和选
才能使用分界点表，否则 择试验条件影响结果
耐药菌株产生了各种破坏抗生素的钝化酶
耐药菌 钝化酶
青霉素 葡萄球菌，G- 杆菌 ß内酰胺酶，酰胺酶
头孢菌素 G- 杆菌 头孢菌素内酰胺酶
链霉素 G- 杆菌 链霉素磷酸转移酶，链霉素
腺苷转移酶
卡那霉素 G- 杆菌，绿脓杆菌 卡那霉素磷酸转移酶，卡那
霉素已酰转移酶，卡那霉素
腺苷转移酶
4、测内酰胺酶P115
1）微生物法：培养基上涂对青霉素菌株，贴1U青霉素纸片
划上一个不含内酰胺酶的菌株作阳性对照内酰胺酶菌株处有
35°C孵育16-18h （-）圆形抑菌环 （+）抑菌环在含内酰胺酶菌株处有凹陷
2）快速方法：产色头孢菌素法
测酸的方法
测碘的方法 青霉素酸争夺碘 绝à无色
临床意义：
微生物法普遍适用。准确，简便，费时，是参考方法
产色头孢菌素法：对葡萄球菌，淋球菌，嗜血杆菌，肠球菌，卡他布
兰汉氏菌适用。
产酸：对肠球菌，卡他布兰汉不适用。
产碘：对淋球菌适用
说明：对肠杆菌科，假单胞菌，其他G-需氧菌测内酰胺酶无意义。因其结果不能说明常用的内酰胺类药物对该菌的敏感性。
为了说明准确测出葡萄球菌是否产生内酰胺酶应用诱导酶法（1ug/片）Ｏxicillin纸片抑菌带边缘取菌做试验。
四、联合药敏试验
1、适应症：病原菌不明的感染
单一药物不能控制的混合感染
全身性绿脓杆菌感染
药物不易渗入部位eg:cns.csf
长期用药可能产生耐药的感染 eg:结核，慢性骨髓炎
病原菌为多耐药菌株
2、方法学：
1）扩散法： P107 图12-3
Q联合用药选择协同作用或累加作用
2）稀释法 棋盘法P108
结果报告：组合药物对被检菌有效的最低浓度
选择原则：组合的药物浓度比对被检菌有效，距中毒浓度又较远。
3）联合用药杀菌试验
五、血清中抗菌浓度测定
1、目的：有效治疗
血药浓度
计算抑菌商数IQ=----------------
MIC
2、适应药物及对象，治疗浓度和中毒浓度接近的药
P111 心肝肾功受损者
需大剂量治疗者
对抗菌药利用差者
选择投药时间 使血药量维持在有效量
3、血药浓度测定：试管 抗菌素倍比稀释 MIC.8mg/ml
血清倍比稀释 MIC 1/4血清
血药浓度32ug/ml
单
血：
已知抗菌素稀释成4个A、B、C、D，对称贴纸片
x:未和血清抗菌素含量
Q对数值（log2）间隔一样Q可用方格纸代替对数坐标纸做图可通过做好的图，查出X的浓度
血浓度报告单需知项目：
药物名称，给药途径，给药剂量、未 次给药时间（峰值取标本），标本名称，采药时间，血清治疗浓度，血清中毒
浓度，血清血药浓度。
六、细菌耐药性扩散及实验室监测：
耐药：天药耐药，获得性耐药（用药不当造成）适用突变，药物选择性压力
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