一、试验用途及原理

  肠道菌增菌肉汤（EE Broth, EE）主要用于肠杆菌科细菌的增菌培养。

  蛋白胨提供蛋白质、维生素和氨基酸；葡萄糖提供碳源；磷酸氢二钠和磷酸二氢钾为缓冲剂；牛胆盐和煌绿为选择性抑菌剂，抑制非肠杆菌科细菌的生长。

  多数肠道菌对胆盐和煌绿有较强的耐受性，可在此培养基中生长，部分细菌可分解葡萄糖大量产酸，煌绿由绿色变成黄色；一些细菌还可分解葡萄糖产气，在培养基上方产生大量气泡；不发酵葡萄糖或发酵葡萄糖产酸较弱的细菌生长后，培养基仍为绿色；革兰氏阳性菌和多数非肠道菌群受胆盐和煌绿的抑制，在此培养基中不生长或生长差。

二、培养基配方（g/L）

三、试验方法

  1、称取本品45g，加热搅拌溶解于1000mL纯化水中，分装三角瓶，每瓶90mL，100℃水浴加热30min进行灭菌，该培养基无需高压灭菌。

  2、培养基灭菌结束后，摇动均匀，之后迅速在流动的冷水中冷却。培养基冷却至室温后，用移液器分装入试管，每管9mL，备用。

  3、制备质控菌株，做10倍系列稀释，选择适宜稀释度的菌悬液，接种至培养基中，并做空白对照。

  4、放置于36℃±1℃恒温培养箱中，需氧培养18h-24h。

四、质控结果

  接种以下质控菌株，放置于36℃±1℃恒温培养箱中，需氧培养18h-24h。试验结果如图1所示。

质控菌株	菌株编号	接种量（CFU）	生长情况	其它特征
大肠埃希氏菌	ATCC 25922	10-100	+++	浑浊，变黄
阴沟肠杆菌	ATCC 23355	10-100	+++	浑浊，变黄
鼠伤寒沙门氏菌	ATCC 14028	10-100	+++	浑浊，变黄
金黄色葡萄球菌	ATCC 25923	100-1000	-	抑制

A:阴性对照 B:大肠埃希氏菌 C:阴沟肠杆菌 D:鼠伤寒沙门氏菌 E:金黄色葡萄球菌

图1 肠道菌增菌肉汤（EE）培养基的质控菌株培养结果

五、试验注意事项

  1、使用非一次性试管等容器进行试验时，应对容器进行无菌处理，以免增加试验的不确定性或污染。

  2、灭菌结束后，注意拿三角瓶瓶口侧部，避免掌心紧握瓶口上部，以免被烫伤。

  3、对该培养基进行分装时应注意无菌操作，避免污染，必要时可采用过滤除菌方式进行分装。

  4、该培养基无需高压灭菌，灭菌后颜色呈绿色，若采用121℃灭菌15min，该培养基可能会产生褪色变黄现象。

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