一、培养基的介绍
在国内外药典标准中,通常都是使用硫乙醇酸盐流体培养基对药品进行需氧厌氧菌的无菌检验(主要是厌氧菌的检验)。此培养基配方更倾向于厌氧菌的培养,而且无需借助厌氧设备即可使用,因此也常用于许多厌氧菌的培养。培养基中少量的琼脂使培养基具有一定的粘度,降低培养基的流动性,阻挡外来氧气的渗入,硫乙醇酸钠和胱氨酸具有较强的还原性,可消耗培养基中溶解的氧气,刃天青做为氧气指示剂,可帮助观察培养基是否处于无氧状态。
二、成分(g/L)
酪胨(胰酶水解) |
15.0 |
酵母浸出粉 |
5.0 |
无水葡萄糖 |
5.0 |
硫乙醇酸钠 |
0.5 |
L-胱氨酸 |
0.5 |
氯化钠 |
2.5 |
刃天青 |
0.001 |
琼脂 |
0.75 |
pH |
7.1±0.2 |
三、氧化层的控制
(1)配制:培养基中少量的琼脂作用为增加粘度、阻挡氧气渗入,因此在配制时必须要先加热煮沸确保琼脂完全溶解均匀,再分装容器。若未加热溶解分装或灭菌导致琼脂溶解不均匀,培养基的粘度不够,后期使用时很容易导致氧气渗入内部,整体培养基逐渐变红色。
(2)分装灭菌:此培养基建议先分装再进行灭菌,灭菌后不要进行摇晃,这样灭菌结束冷却后培养基通常可以清晰看到下层呈淡黄色,表层呈红色。若先灭菌再分装,分装过程会接触氧气,导致分装后的培养基呈现红色,可以在无氧环境分装避免这个现象出现。
(3)分装容器:液面深度不够、接触氧气过多、液面面积大都易导致氧气的快速渗入,因此在分装容器中应保持液体具有一定的深度,尽可能减少液面的表面积(即选用细高型容器),同时减少容器内的空气。
(4)充氮气:在进行长期储存时,或者容器内的空气较多时,可采用充氮气的方式,保护培养基不被氧化,可以使培养基保存更长时间。
(5)加热除氧:当培养基内氧化层超过1/3时,可以采用水浴加热方式驱氧一次。沸水浴后静置培养基置冷却,通常氧化层会减少,但只可水浴加热驱氧一次,加热过度会影响培养基的性能。
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