一、产品用途及原理
用途:用于大肠埃希氏菌、O157菌、单增李斯特氏菌、肠杆菌科等的生化鉴定。
添加剂:每盒需配套1盒甲基红试剂盒HB8280与1盒V-P试剂盒HB8281使用。
原理:䏡胨提供碳氮源、维生素和生长因子;葡萄糖为可发酵的糖类;磷酸氢二钾是缓冲剂。
MR实验中,不同细菌分解葡萄糖的产物不同,大肠埃希氏菌、单增李斯特氏菌可分解葡萄糖产生大量酸,使pH值下降到4.5以下,滴入甲基红显红色,即为MR阳性;产气肠杆菌产酸较少,滴入甲基红显橙黄色。
V-P实验中产气肠杆菌、单增李特氏菌分解葡萄糖产生丙酮酸,并使丙酮酸脱羧,生成中性的乙酰甲基甲醇,在碱性溶液中被空气氧化生成二乙酰,继续与培养基中的胍基反应生成红色化合物,即为V-P阳性。
二、培养基配方(g/L)
䏡胨 |
7.0 |
葡萄糖 |
5.0 |
磷酸氢二钾 |
5.0 |
pH值6.9±0.2(25℃) |
三、试验方法
1、取适量培养物制备菌悬液,接种于MR-VP生化管中,36℃±1℃培养24h-48h。
2、甲基红(MR)试验
按照甲基红试剂盒说明书滴加甲基红试剂,立即观察结果。鲜红色为阳性,黄色为阴性。
3、V-P试验
按照V-P试剂盒说明书滴加V-P试剂,充分振摇生化管,观察结果。阳性反应立刻或于数分钟内出现红色,如为阴性,应放在36℃±1℃继续培养4h再进行观察。
四、质控结果
接种以下质控菌株,放置于36℃±1℃需氧培养24h-48h。结果如图1。
质控菌株 |
菌株编号 |
接种量(CFU) |
方法 |
质控结果 |
大肠埃希氏菌 |
ATCC 25922 |
>5000 |
定性 |
MR:+(变红);VP:- |
单增李斯特氏菌 |
ATCC 19114 |
>5000 |
定性 |
MR:+(变红);VP:+(变红) |
普通变形杆菌 |
ATCC 13355 |
>5000 |
定性 |
MR:+(变红);VP:- |
产气肠杆菌 |
ATCC 13048 |
>5000 |
定性 |
MR:-;VP:+(变红) |
大肠埃希氏菌O157 |
ATCC 35150 |
>5000 |
定性 |
MR:+(变红);VP:- |
培养24h:
培养32h:
培养40h:
培养44h:
培养48h:
培养52h:
图1 MR-VP生化鉴定管微生物质控结果
由图1所示,接种质控菌液后培养24h至52h的生化鉴定结果均相同。
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