一、双歧杆菌属情况简要介绍：

  双歧杆菌属（Bifidobacterium）是一种革兰氏阳性、不运动、细胞呈杆状、一端有时呈分叉状、严格厌氧的细菌属，广泛存在于人和动物的消化道、阴道和口腔等生境中。双歧杆菌属的细菌是人和动物肠道菌群的重要组成成员之一。

  在1899年，法国巴斯德研究所的儿科医生Henry Tissier从母乳喂养的健康婴儿的粪便中分离出的一种厌氧的革兰氏阳性杆菌，命名为Bacillus bifidus。随后，Tissier发现这种分叉状的杆菌能治疗肠道感染方面的疾病。在Tissier发现双歧杆菌以后，人们发现了更多的双歧杆菌属的成员，人们对双歧杆菌的生理功能进行了深入的发掘与研究，经过一个世纪的发展，特别是近年肠道微生物组学研究的发展，人们越来越认识到双歧杆菌的重要性。双歧杆菌在医药、食品等方面也得到了广泛的应用。

二、产品用途及检验原理：

  该培养基用于食品中双歧杆菌的分离培养或计数。

  添加剂：每瓶需配套添加8盒HB0384-6a莫匹罗星锂盐和2盒HB0384-11a半胱氨酸盐酸盐溶液使用。

蛋白胨、牛肉浸粉、酵母浸粉在培养基中作为基础营养物质提供细菌生长所需的氮源、碳源和其他的生长因子；葡萄糖为可发酵糖类；磷酸氢二钾为pH缓冲剂；柠檬酸三铵、醋酸钠、硫酸镁、硫酸锰和吐温80为培养各种乳酸菌提供生长因子，其成分还能抑制某些杂菌并中和细胞毒性物质，为乳酸菌提供一个良好的生长环境；莫匹罗星锂盐抑制除双歧杆菌外的其他乳酸菌的生长；半胱氨酸盐酸盐具有降低氧化还原电位的作用，防止过氧化物的积累对某些菌产生毒性，有利于厌氧菌的生长；琼脂为培养基的凝固剂。

三、培养基配方（g/L）：

四、试验方法：

  1. 称取本品66.2g，加热溶解于1000mL蒸馏水中，分装，121℃高压灭菌15-20分钟，冷至48℃左右，每200mL培养基中加入过滤除菌的莫匹罗星锂盐10mg和半胱氨酸盐酸盐0.1g，混匀。

  2. 目标菌：10倍梯度稀释法制备质控菌株菌悬液，吸取适宜梯度的菌悬液倾注接种于待测培养基和参比培养基；

非目标菌：用1µL接种环取选择性测试工作菌悬液1环，在待测培养基表面划六条平行直线。

  3. 放置于恒温培养箱36℃±1℃厌氧培养48h±2h，观察试验结果。

五、试验结果判断：

  接种以下质控菌株，放置36℃±1℃厌氧培养48h±2h，试验结果如图1所示。

质控菌株	菌株编号	接种量 （CFU）	参比或计 数培养基	方法	生长情况	其他特征
婴儿双歧杆菌	CICC 6069	20-200	MRS	定量	PR≥0.7	圆形凸起，边缘整齐，无色不透明
德氏保加利亚亚种	CICC 6032	/	/	半定量	G≤1	抑制
嗜热链球菌	CICC 6038	/	/	半定量	G≤1	抑制
嗜酸乳杆菌	CICC 6005	/	/	半定量	G≤1	抑制

  质控目标菌（婴儿双歧杆菌）在MRS上的计数结果：

  质控菌在改良MRS上的生长情况：

图1 莫匹罗星锂盐和半胱氨酸盐酸盐改良MRS琼脂培养基微生物质控结果

六、注意事项

  1. 非目标菌检验时，用接种环而不用接种针，接种环应完全浸入培养基中。取一满环接种物，将接种环接触容器边缘3次可去除多余的液体。划线时，接种环与琼脂平面的角度应为20°~30°。接种环压在琼脂表面的压力和划线速度前后一致，整个划线应快速连续，移取液体培养物时应将接种环伸入培养液下部分以防止环上产生气泡或泡沫。

  2. 婴儿双歧杆菌为厌氧菌，氧气对其有毒害作用，应在厌氧操作箱中操作，若是在正常环境中操作，从厌氧菌暴露在空气中开始到放入厌氧环境中培养结束，整个过程应尽可能快速操作，一般不超过15分钟，暴露时间越长，厌氧菌越容易死亡。

  厌氧菌培养相关信息可参考原创文章：专性厌氧菌的培养方法及注意事项-点击查看。

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