银河澳门官网入口,银河集团网址登录



银河澳门官网入口,银河集团网址登录

中文版  |   English  |   加入收藏  |   客服热线:400-0532-596
微生物技术资料
文章检索
  首页 > 微生物知识->微生物检测方法和标准->铜绿假单胞菌检验方法-化妆品安全技术规范(2022年版)

铜绿假单胞菌检验方法-化妆品安全技术规范(2022年版)



录入时间:2022-11-29 13:56:58 来源:2022年版化妆品安全技术规范

1.范围

  本规范规定了化妆品中铜绿假单胞菌的检验方法。

  本规范适用于化妆品中铜绿假单胞菌的检验。

 

2.定义

  2.1铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa

  属于假单胞菌属,为革兰氏阴性杆菌,氧化酶阳性,大部分能产生绿脓菌素。

 

3.仪器

  3.1 恒温培养箱:36℃±1℃、42℃±1℃。

  3.2 三角瓶:250mL。

  3.3 试管:18 mm×150mm。

  3.4 灭菌平皿:直径90mm。

  3.5 灭菌刻度吸管:10mL、 1mL。

  3.6 显微镜。

  3.7 载玻片。

  3.8 接种针、接种环。

  3.9 电磁炉。

  3.10 高压灭菌器。

  3.11 恒温水浴箱。

 

4.培养基和试剂

  4.1 SCDLP液体培养基

  见总则中3.2。

  4.2 十六烷基三甲基溴化铵培养基

  成分:
    牛肉膏
3g

    蛋白胨
10g

    氯化钠
5g

    十六烷基三甲基溴化铵
0.3g

    琼脂
20g

    蒸馏水
1000mL
  制法:除琼脂外,将上述成分混合加热溶解,调pH7.4~7.6,加入琼脂,115℃高压灭菌20min后,制成平板备用。

  4.3 乙酰胺培养基

  成分:
    乙酰胺
10.0g

    氯化钠
5.0g

    无水磷酸氢二钾
1.39g

    无水磷酸二氢钾
0.73g

    硫酸镁(MgSO4.7H2O)
0.5g

    酚红
0.012g

    琼脂
20g

    蒸馏水
1000mL

  制法:除琼脂和酚红外,将其他成分加到蒸馏水中,加热溶解,调pH7.2,加入琼脂、酚红,121℃高压灭菌20min后,制成平板备用。

  4.4 绿脓菌素测定用培养基

  成分: 蛋白胨
20g

氯化镁
1.4g

硫酸钾
10g

琼脂
18g

甘油(化学纯)
10g

蒸馏水
1000mL
  制法:将蛋白胨、氯化镁和硫酸钾加到蒸馏水中,加热使其溶解,调pH7.4,加入琼脂和甘油,加热溶解,分装于试管内,115℃高压灭菌20min后,制成斜面备用。

  4.5 明胶培养基

  成分:
牛肉膏    
3g

蛋白胨
5g

明胶
120g

蒸馏水
1000mL
  制法:取各成分加到蒸馏水中浸泡20min,随时搅拌加热使之溶解,调pH7.4,分装于试管内,经115℃高压灭菌20min后,直立制成高层备用。

  4.6 硝酸盐蛋白胨水培养基

  成分:
蛋白胨   
10g

酵母浸膏  
3g

硝酸钾
2g

亚硝酸钠
0.5g

蒸馏水
1000mL

  制法:将蛋白胨和酵母浸膏加到蒸馏水中,加热使之溶解,调pH7.2,煮沸过滤后补足液量,加入硝酸钾和亚硝酸钠,溶解混匀,分装到加有小倒管的试管中,115℃高压灭菌20min后备用。

  4.7 普通琼脂斜面培养基

  成分:
蛋白胨   
10g

牛肉膏
3g

氯化钠
5g

琼脂
15g

蒸馏水
1000mL
  制法:除琼脂外,将其余成分溶解于蒸馏水中,调pH7.2~7.4,加入琼脂,加热溶解,分装试管,121℃高压灭菌20min后,制成斜面备用。

 

5操作步骤

  5.1 增菌培养:1:10检液10mL加到90mL SCDLP液体培养基中,36℃±1℃培养18h~24h。如有铜绿假单胞菌生长,培养液表面多有一层薄菌膜,培养液常呈黄绿色或蓝绿色。

  5.2 分离培养:将增菌后的培养物,划线接种在十六烷三甲基溴化铵琼脂平板上,置36℃±1℃培养18h~24h。凡铜绿假单胞菌在此培养基上,其菌落扁平无定型,向周边扩散或略有蔓延,表面湿润,菌落呈灰白色,菌落周围培养基常扩散有水溶性色素。

  在缺乏十六烷三甲基溴化铵琼脂时也可用乙酰胺培养基进行分离,将增菌后的培养物划线接种于平板上,置36℃±1℃培养24h±2h,铜绿假单胞菌在此培养基上生长良好,菌落扁平,边缘不整,菌落周围培养基呈红色,其他菌不生长。

  5.3 染色镜检:挑取可疑的菌落,涂片,革兰氏染色(见耐热大肠菌群检验方法4.5.2),镜检为革兰氏阴性者应进行氧化酶试验。

  5.4 氧化酶试验:取一小块洁净的白色滤纸片置于灭菌平皿内,用无菌玻璃棒挑取铜绿假单胞菌可疑菌落涂在滤纸片上,然后在其上滴加一滴新配制的1%二盐酸二甲基对苯二胺试液,在15s~30s之内,出现粉红色或紫红色时,为氧化酶试验阳性;若培养物不变色,为氧化酶试验阴性。

  5.5 绿脓菌素试验:取可疑菌落2~3个,分别接种在绿脓菌素测定用培养基上,置36℃±1℃培养24h±2h,加入三氯甲烷3mL~5mL,充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于三氯甲烷液内,待三氯甲烷提取液呈蓝色时,用吸管将三氯甲烷移到另一试管中并加入1mol/L的盐酸1mL左右,振荡后,静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性,表示被检物中有绿脓菌素存在。

  5.6 硝酸盐还原产气试验:挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物,接种在硝酸盐胨水培养基中,置36℃±1℃培养 24h±2h,观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基内的小倒管中有气体者,即为阳性,表明该菌能还原硝酸盐,并将亚硝酸盐分解产生氮气。

  5.7 明胶液化试验:挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物,穿刺接种在明胶培养基内,置36℃±1℃培养24h±2h,取出放置于4℃±2℃冰箱10min~30min,如仍呈溶液状或表面液化时即为明胶液化试验阳性;如凝固不溶者为阴性。

  5.8 42℃生长试验:挑取可疑的铜绿假单胞菌纯培养物,接种在普通琼脂斜面培养基上,置于42℃±1℃培养箱中,培养24h~48h,铜绿假单胞菌能生长,为阳性,而近似的荧光假单胞菌则不能生长。

 

6.检验结果报告

  被检样品经增菌分离培养后,平板上有可疑菌落,并经证实为革兰氏阴性杆菌、氧化酶及绿脓菌素试验皆为阳性,即可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌;如绿脓菌素试验阴性而明胶液化、硝酸盐还原产气和 42℃生长试验三者皆为阳性时,仍可报告被检样品中检出铜绿假单胞菌。

 

上一篇:耐热大肠菌群检验方法-化妆品安全技术规范(2022年版)

下一篇:金黄色葡萄球菌检验方法-化妆品安全技术规范(2022年版)

首页 | 关于我们 | 网上商城 | 在线客服 | shchuhu.com
业务联系电话
   400-0532-596 0532-66087773
   0532-66087762 0532-81935169
邮箱:qdhbywg@vip.126.com
地址:青岛市城阳区锦汇路1号A2栋
产品技术咨询
  工作日(周一至周六8:00-18:00):
  18562658263 13176865511
  其它时段:13105190021
投诉与建议:13105190021 13006536294