【原理】

  甲烷细菌是一类严格厌氧细菌。其可利用CO₂，和H₂，或乙酸、甲醇等作碳源和能源，可利用无机铵盐作氮源，还需要若干微量元素等。据此，配制本培养基时要将培养基中氧气排除，并将甲烷细菌的这些营养成分分装在无氧试管中，灭菌后用。

【成分】

a．液磷酸氢二钾	348mg
磷酸二氢钾	227mg
氯化铵	500mg
硫酸镁	500mg
硫酸铁(FeSO4·7H20)	2mg
氯化钙(CaCl2·2H20)	250mg
H2/CO2(80/20)0.2Pa	0.2Pa(20℃）或
乙酸钠	100mmol
甲醇	200mmol
三甲氨	100mmol
琼脂（液体培养基不加）	20g
氯化钠	2.25g
刃天青	1mg
碳酸氢钠	850mg
蒸留水	1000ml
微量元素溶液(b液）	3ml
维生素溶液(c液）	10ml
b．半胱氨酸	300mg/L
c.Na2S.nH2O(n=7-9)	300mg/L

【制法】

  按照配方a准确秤量，磁力搅拌溶解混匀，倒入烧瓶中加热沸腾使刃青天褪色后，将烧瓶置于冰浴冷却，同时将无氧的CO₂/N₂(20/80）充入烧内的培养液中，排除其中剩余的氧15分钟，然后用26%NaOH溶液调至pH7.0，接着将培养液分装于无氧小试管中，每管5ml，并在试管气相部分充人H₂/CO₂(80/20)，立即用胶塞密封，121℃灭菌30分钟备用。

  b、c液配制：先量取若干蒸馏水分别放入二只玻璃中，然后分别充入无氧N₂10分钟，再将预先秤好的b、c溶质分别加入玻璃中，立即用胶塞塞紧，并用铝盖固定，121℃灭菌30分钟备用。

【用途】

  分离培养和鉴定甲烷细菌。

【注意事项】

  液体培养基在使用之前，要用无菌注射器先经无氧N₂冲洗，然后取一定量的b、c溶液注入培养液a中，

充分摇匀后再接种。固体滚管培养基，加热溶化后冷却至55℃左右，加入一定量的b、c溶液，充分摇匀后，立即在冰屑上迅速滚动，使培养基在管壁均匀凝固，然后用无菌接种环取少量菌体，在滚管壁培养基上划线，同时充入无氧的N₂/CO₂,或H₂/CO₂(80/20)，接种完毕立即塞紧胶塞培养。

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